实验步骤篇之“血块中DNA的提取”

一、操作步骤

    1. 取15ml的研磨器，加入血块样本后，再加入4-5ml的溶血试剂，研磨至血块消失后再研磨2-3min，然后移入到15ml离心管中；3000rpm，离心10min。
    2. 离心结束后，弃去上层液后，加入8-10ml的溶血试剂，使用一次性滴管将沉淀吹打均匀；3000rpm，离心10min。
    3. 待离心结束后，弃去上层液，再加入1ml溶血试剂，使用微呈移液器将沉淀吹打均匀，转移至2ml的EP管中；6000rpm，离心10min。
    4. 弃去上清液，加入1ml细胞裂解液，将沉淀震荡均匀后，每个离心管加入10ul的蛋白酶k(20mg/ml)，37°C恒温水浴过夜，或者是56°C水浴3小时。
    5. 水浴结束后，在通风橱内，每管加入1ml(等体积）平衡酚，上下颠倒混匀50次后，6000rpm，离心10min。离心结束后，吸取上清与另一个2mlEP管（水相含有DNA，白色絮状物为蛋白）。
    6. 重复步骤5
    7. 吸取上清与一个2mlEP管，然后加入等体积的氯仿／异戊醇（24:1）上下颠倒混匀50次，6000rpm，离心10min。
    8. 吸取上清液与另一个1.5mlEP管中，加入100ul3MNaAc（ph=5）轻轻混匀后，再加入等体积预冷（-20℃）的异丙醇，上下颠倒混匀150次，混匀时的动作要轻柔，混匀结束后可见白色的絮状物（即为DNA)，10000rpm，离心5min。
    9. 弃去上清液，加入350-500ul无水乙醇，轻轻振洗，然后10000rpm，离心5min，(如在去除酒精的时候，DNA沉淀有悬浮，可以加大离心的转速），将酒精倒掉，把EP管放在通风橱中风干。（一般约两小时即可，如没有完全风干，可以适当的延长时间。）
    10. 待DNA风干后，加入TE100ul，在4°C冰箱中存放约十天后，使用紫外分光计检测DNA的浓度和纯度，依据所测浓度稀释分装，分装完成后将三种液体置于-20″C的冰箱中保存备用。

二、所用器材

三、所需试剂

    • 溶血试剂，细胞裂解液，蛋白酶-K
    • 平衡酚，氯仿／异戊醇，醋酸钠，异丙醇，无水乙醇，TE缓冲液
    • 10%SDS、1M NaCI、0.5M EDTA、lM Trisbase-Hcl
    • 十二浣基硫酸钠（SDS）
    • 三经甲基氨基甲浣（Tris）
    • 乙二胺四乙酸（EDTA）、蔗糖、MgCl2
    • 曲拉通X-100：辛基苯基聚氧乙烯醚
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